串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP-MS * 實(shí)驗(yàn)介紹
串聯(lián)親和純化質(zhì)譜（TAP MS）技術(shù)采用兩輪純化的方法調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白復(fù)合體。首先，在目的細(xì)胞中過表達(dá)帶有TST-Flag雙標(biāo)簽的誘餌蛋白；樣本經(jīng)裂解后，先與Streptactin樹脂孵育、初次洗滌及洗脫，得到首次純化的蛋白復(fù)合物；再將此蛋白復(fù)合物與anti-Flag樹脂結(jié)合、再次洗滌及洗脫，得到第二輪純化的蛋白復(fù)合物；最后，質(zhì)譜鑒定復(fù)合物中的誘餌蛋白互作蛋白。
輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，專業(yè)提供分子互作實(shí)驗(yàn)服務(wù)，包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù)，經(jīng)驗(yàn)豐富，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、可靠。
我公司自有分子、細(xì)胞和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，能執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線，對(duì)微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力，對(duì)后續(xù)功能分析有獨(dú)到見解。
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串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP-MS * 實(shí)驗(yàn)流程
串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP MS * 應(yīng)用背景
隨著確定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用成為當(dāng)今生命科學(xué)的研究熱點(diǎn)，雙雜交技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于研究蛋白—蛋白間的相互作用，但由于其篩選步驟復(fù)雜，假陽性結(jié)果較多，難于量化，故不能滿足大規(guī)模蛋白質(zhì)研究的需要，因此串聯(lián)親和純化（TAP）技術(shù)以其高效、高純度、以及能夠高度模擬真實(shí)生理?xiàng)l件等優(yōu)勢，迅速成為篩選、發(fā)現(xiàn)和鑒別新的相互作用蛋白質(zhì)的主流技術(shù)之一。
目前，TAP技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)的聯(lián)用，以及質(zhì)譜技術(shù)的自動(dòng)化，使得大規(guī)模地分析相互作用的蛋白質(zhì)在技術(shù)上成為可能。
TAP技術(shù)采用兩步親和純化，提高了純化產(chǎn)物的特異性，具有周期短、假陽性結(jié)果少等優(yōu)點(diǎn)。通過這種方法鑒定到的蛋白質(zhì)相互作用能真實(shí)地反映出細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子之間的聯(lián)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加接近真實(shí)情況，而且TAP技術(shù)還特別適用于蛋白質(zhì)組水平上的大規(guī)模研究。
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串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP MS * 輝駿服務(wù)內(nèi)容
| TAP（串聯(lián)親和純化）檢測服務(wù) |
| 服務(wù)項(xiàng)目 | 服務(wù)內(nèi)容 | 結(jié)果交付 | 實(shí)驗(yàn)周期 | 客戶提供 | 價(jià)格
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| TAP MS | 構(gòu)建誘餌蛋白的TAP雙標(biāo)簽表達(dá)載體
| 載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告 | 約2周 | 含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件 待測細(xì)胞及其培養(yǎng)方法 實(shí)驗(yàn)信息表（樣本信息、誘餌蛋白序列） |
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| 包裝慢病毒并進(jìn)行誘餌蛋白的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選 | 慢病毒包裝和穩(wěn)轉(zhuǎn)株實(shí)驗(yàn)報(bào)告 | 5-6周 |
| Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白 | Western blot檢測圖 | 7-8周 |
TAP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白 （2組：實(shí)驗(yàn)組、空載對(duì)照組） | TAP實(shí)驗(yàn)報(bào)告 |
| Western blot檢測TAP產(chǎn)物中的誘餌蛋白 | Western blot檢測圖 |
| LC-MS/MS定性檢測TAP產(chǎn)物的蛋白、篩選實(shí)驗(yàn)組獨(dú)有蛋白（潛在互作蛋白） | 質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報(bào)告
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| 針對(duì)互作蛋白做生物信息學(xué)分析（GO、KEGG pathway、String） | 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告 | 1周 |
串聯(lián)親和純化TAP MS * 結(jié)果示例
TAP MS：Western blot檢測圖
TAP MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）
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TAP-MS實(shí)驗(yàn)研究案例—客戶文章解析
Hadir Marei. et al: Differential Rac1 signalling by guanine nucleotideexchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration.
Nat Communications. 2016，IF=14.919.
鳥嘌呤核苷酸交換因子的差異rac1信號(hào)涉及FLII在調(diào)節(jié)rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞遷移中的作用
研究概述
小的GTP酶 rac1與腫瘤的形成和擴(kuò)散有關(guān)。當(dāng)被鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)激活時(shí)，rac1與細(xì)胞中的各種蛋白質(zhì)結(jié)合，從而調(diào)節(jié)各種功能，包括細(xì)胞遷移。然而，當(dāng)在臨床環(huán)境中以rac1為靶點(diǎn)時(shí)，rac1的激活可以導(dǎo)致相反的遷移表型，增加了加劇腫瘤進(jìn)展的可能性。這就需要確定影響rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的因素。本研究證實(shí)P-Rex1不僅能激活rac1，而且還能將蛋白質(zhì)(如FLII)定向到rac1的活性形式，以介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能，包括細(xì)胞收縮，從而使P-Rex1能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移。因此，這項(xiàng)研究提供了對(duì)以前未報(bào)道的P-REx1-rac1介導(dǎo)細(xì)胞遷移的細(xì)胞功能的洞察力，并強(qiáng)調(diào)了P-Rex1和rac1可能驅(qū)動(dòng)癌癥擴(kuò)散其他模式。
研究路線
過表達(dá)與 pull down實(shí)驗(yàn)證實(shí)Tiam1和P-Rex1誘導(dǎo)不同的rac1下游效應(yīng)
通過TAP/ SILAC結(jié)合的方法檢測 Tiam1或 P-Rex1誘導(dǎo)后的rac1相互作用體，證實(shí)Tiam1和P-Rex1對(duì)racl互動(dòng)體有不同的調(diào)控作用
免疫共沉淀、 GST pull down和PLA實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)FLII優(yōu)先與活性racl結(jié)合FLII是一種新的富含P-RExl的rac1結(jié)合伙伴
結(jié)構(gòu)域分析證實(shí)FLII通過不同的結(jié)構(gòu)域與rac1和P-Rex1結(jié)合
Pull down實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)FLII是P-REx1-rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞遷移所必需的
基因敲除實(shí)驗(yàn)表明P-Rex1可以通過FLII介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能，包括細(xì)胞收縮，從而促進(jìn)細(xì)胞遷移
TAP MS * 客戶文章
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