miRNA pull down實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

miRNA pull-down是研究目標(biāo)miRNA與其他RNA或RNA結(jié)合蛋白（RBPs）之間相互作用的技術(shù)。

體外miRNA pull-down：首先合成生物素標(biāo)記的miRNA探針（也可以是pre-miRNA或pri-miRNA探針），在體外條件下將其結(jié)合到鏈霉親和素磁珠上，再與待測(cè)樣本裂解液孵育，捕獲與miRNA結(jié)合的其他RNA（如mRNA、lncRNA和circRNA）或RBPs；提取的RNA可以采用qPCR方法檢測(cè)，洗脫的蛋白質(zhì)可以采用western-blot或質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)檢測(cè)。

體內(nèi)miRNA pull-down：將生物素標(biāo)記的miRNA探針轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，裂解細(xì)胞后，采用鏈霉親和素磁珠捕獲樣本裂解液中的生物素miRNA-RNA復(fù)合物；隨后，洗脫純化得到RNA，并進(jìn)行高通量測(cè)序或qPCR檢測(cè)。

輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，專業(yè)提供分子互作實(shí)驗(yàn)服務(wù)，包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù)，經(jīng)驗(yàn)豐富，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細(xì)胞和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，能執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線，對(duì)微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力，對(duì)后續(xù)功能分析有獨(dú)到見解。

我們不僅會(huì)提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表，確保您安心進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿。

目前，客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章（點(diǎn)擊查看客戶文獻(xiàn)）。

miRNA pull down實(shí)驗(yàn)流程

輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖

圖一：miRNA pull-down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖

輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理.png

圖二：miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理圖

miRNA pull-down應(yīng)用背景

MicroRNA（miRNA）是真核生物中廣泛存在的一種長(zhǎng)約21~23個(gè)核苷酸的RNA分子。miRNA的產(chǎn)生也是一個(gè)高度調(diào)控的多步驟過程。首先，攜帶miRNA信息的基因被轉(zhuǎn)錄成初級(jí)miRNA（pri-miRNA），再被Drosha復(fù)合體剪切成具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA（pre-miRNA），最后被Dicer復(fù)合體進(jìn)一步切割，產(chǎn)生成熟的miRNA。成熟的miRNA與Argonaute蛋白等組裝形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RISC），常常特異性結(jié)合靶RNA（例如mRNA、lncRNA、circRNA）并調(diào)控其表達(dá)。

每個(gè)miRNA可以有多個(gè)靶基因，而幾個(gè)miRNAs也可以調(diào)節(jié)同一個(gè)基因，并且這種調(diào)控是動(dòng)態(tài)變化的。此外，從miRNA的生成、轉(zhuǎn)運(yùn)到發(fā)揮功能，都需要很多蛋白質(zhì)的參與。因此，研究miRNA與RNA、蛋白質(zhì)的結(jié)合對(duì)揭示很多生物學(xué)現(xiàn)象具有重要意義。

技術(shù)支持聯(lián)系

18927549347、13430303037

miRNA pulldown實(shí)驗(yàn)—輝駿生物服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實(shí)驗(yàn)周期	客戶提供	價(jià)格
體外miRNA Pull-down qPCR	合成生物素miRNA探針	探針合成報(bào)告	5-6周	miRNA序列待測(cè)RNA序列實(shí)驗(yàn)樣本	點(diǎn)擊詢價(jià)
	qPCR檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶RNA	Input qPCR檢測(cè)結(jié)果
	miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測(cè) （實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）	pull-down qPCR檢測(cè)結(jié)果 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
體內(nèi)miRNA Pull-down qPCR	合成生物素miRNA探針	探針合成報(bào)告	7-8周	miRNA序列待測(cè)RNA序列待轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其培養(yǎng)方法	點(diǎn)擊詢價(jià)
	qPCR檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶RNA	Input qPCR檢測(cè)結(jié)果
	miRNA探針轉(zhuǎn)染細(xì)胞	pull-down qPCR檢測(cè)結(jié)果 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
	miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測(cè) （實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）
體外miRNA Pull-down WB	合成生物素miRNA探針	探針合成報(bào)告	5-6周	miRNA序列待測(cè)RNA序列待測(cè)蛋白序列待測(cè)蛋白抗體	點(diǎn)擊詢價(jià)
	Western blot（WB）檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶蛋白	Input WB檢測(cè)結(jié)果
	miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體并檢測(cè) （實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）	pull-down WB檢測(cè)結(jié)果 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
體外miRNA Pull-down MS	合成生物素miRNA探針	探針合成報(bào)告	6-7周	miRNA序列實(shí)驗(yàn)樣本	點(diǎn)擊詢價(jià)
	miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體（實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）	pull-down產(chǎn)物SDS-PAGE圖 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
	LC-MS/MS檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析	質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果和報(bào)告互作蛋白篩選表格
	生物信息學(xué)分析（GO、KEGG pathway、String）	生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告

miRNA Pull-down樣本要求

1. 送樣量要求

樣本類型	miRNA pull down WB/qPCR建議送樣量	miRNA pull down MS建議送樣量
動(dòng)物細(xì)胞	2*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約2個(gè)10cm皿）	3*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約3個(gè)10cm皿）
動(dòng)物組織	1g/組	2g/組